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编号:10245028
干眼症结膜印迹细胞学研究
http://www.100md.com 《眼视光学杂志》 1999年第3期
     作者:宋丽红 金秀英 孙旭光 杨宝玲

    单位:北京市眼科研究所(100005)

    关键词:结膜印迹细胞学(CIC);杯状细胞;SS干眼;非SS干眼

    眼视光学杂志/990309摘 要 目的:探讨结膜印迹细胞学检查(CIC)在干眼诊断中的作用。方法:对45人90眼正常组和80人160眼实验组除采用泪液分泌实验I(S-I-T)、泪膜破裂时间(BUT)、虎红染色(RBS)及荧光素染色(FLS)计分等常用眼表泪功能检查外,重点采用CIC,通过观察结膜上皮细胞情况及杯状细胞数来了解正常眼、干眼的泪膜粘液层的情况。结果:印迹细胞学分级及杯状细胞数组间均有显著的差异,正常组分级主要集中于0级;非SS干眼组的分级主要集中于1级和2级;SS干眼组的分级主要集中于2级及3级。杯状细胞与虎红色计分呈负相关。结论:结膜印迹细胞学检查通过分级、观察杯状细胞数变化,了解泪膜粘液层的情况可用于区分正常人与干眼症患者并可了解干眼的病程变化。
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    A study of conjunctival impression cytology for dry eye

    Song Lihong,Jin Xiuying,Sun Xuguang,et al.

    Beijing Institute of Ophthalmology,Beijing 100005

    Abstract Objective:To evaluate the applicability of Conjunctival Impression Cytology(CIC) to the diagnosis of dry eye.Methods:In addition to the Schirmer Test for Tear Break-Up Time,Rose Bengal Staining and Fluorescein Staining were used.We tested the tear film mucous layer by CIC for a control group and for dry eye patients.Results:CIC grading of the controls revealed 80% of the eyes to be grade 0 and 20% to be grade 1;for the dry eyes,70% were grade 2 and grade 3.This demonstrates a significant differences between the two groups.There is a negative correlation between goblet cell density and RBS results.Conclusion:CIC grading and goblet cell density can be used to assess the mucous layer to distinguish between normal and dry eye patients as well as to track the progression of dry eye.
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    Key words Conjunctival Impression Cytology(CIC) Goblet cell Sjogren Syndrome(SS) dry eye Non-SS dry eye

    泪膜最内层为粘液层,粘液层粘附于角膜微绒毛、微皱壁上,使泪膜能均匀地覆盖于眼表,并可降低眼表面张力。粘液主要由结膜杯状细胞产生,而结膜杯状细胞数目及结膜表层细胞形态学改变可通过结膜印迹细胞学(CIC)来观察。

    1 材料和方法

    1.1 研究对象

    正常对照组:1997年11月至1998年10月间同仁医院验光中心诊断无眼病的人群共45人(90眼)。年龄36岁至68岁(平均51.6±9.7岁),男8人、女37人。经裂隙灯仔细检查,排除干眼、睑缘炎及眼过敏症,无眼睑及眼表异常,无角膜接触镜配戴史,无影响泪液分泌的全身与局部用药史,无眼部手术史,无胶原血管病或其它全身疾病史。
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    实验组:经检查符合角结膜干燥症(KCS)诊断标准[1]即纳入实验组,共80人。实验组又分为非Sjogren综合征(SS)干眼组与SS干眼组。

    SS干眼组:经内科、口腔科会诊,符合Tsubota K等[2]诊断标准纳入此组。具体标准如下:a.KCS;b.口腔干燥;c.唇腺活检广泛淋巴细胞侵润;d.实验室检查:RF(+),ANA(+)或抗SS—A抗体(+)/抗SS—B抗体(+)。凡具以上至少3个条件,则诊断为SS。本组患者30人。年龄35岁至73岁(平均50.2±11.6岁),男3人,女27人。

    非SS干眼组:另外无SS诊断指征的50人既被纳入非SS干眼组。年龄35岁至70岁(48.6±10.6岁),男10人、女40人,其中很大一部分患者抗核抗体或和自身抗体阳性。

    1.2 常用泪液检查方法
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    1.2.1 泪液分泌试验I(S-I-T):室内普通光线下,采用标准泪液分泌量测试条(SHOWA YAKUHIN KAKO CO.,LTD)检测,折线处折起,置于下睑中外1/3结膜囊内,5分钟取下从折起处记湿长。

    1.2.2 泪膜破裂时间(BUT):1%荧光素钠10μl滴入结膜囊,眨眼数次后用裂隙灯观察泪膜,测BUT,连测三次取其平均值。

    1.2.3 荧光素染色(FLS):1%荧光素钠10μl滴入结膜囊内,眨眼数次,裂隙灯钴蓝光下观察角膜上、中、下三部分荧光素着染情况,每部分按0~3计分[3]。0示无着染;1示散在点染;2示中等量斑点染色;3示密集斑点状染色。

    1.2.4 虎红染色(RBS):1%虎红10μl滴入结膜囊内,眨眼数次,裂隙灯绿光观察鼻侧球结膜、角膜、颞侧球结膜三部分,每部分按0~3计分[3]。0示无着染;1示散在点染;2示中等量斑点染色;3示密集斑点状染色。
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    1.3 CIC检查

    1.3.1 材料

    0.2μm孔径醋酸纤维素滤纸,切剪成6mm直径大小,浸蒸馏水中3~4小时,以消除滤纸表面活性,取出、晾干、高压消毒、备用。

    1.3.2 方法

    ①患者平卧于检查床上,0.5%的卡因点眼2次,开睑器开睑。

    ②滤纸吸去下穹隆部泪液。

    ③小颞子夹取醋酸纤维滤纸,粗糙面向下置于角膜颞侧水平2mm外的球结膜上,60g压力(眼动脉压力计),持续6秒印取表层上皮细胞,将滤纸片置于10%福尔马林中固定。

    ④标本PAS染色:略。
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    ⑤标本脱水后置于载玻片上,自然干燥,采用二甲苯使其透明,置于普通光学显微镜下观察上皮细胞的连接,胞核、胞浆的颜色,核、浆比(N/C),上皮细胞角化,杯状细胞数及炎性细胞的有无,然后进行分级。

    1.3.3 分级:据NELSON’s分级标准进行分级[4]

    0级:结膜上皮细胞形态正常,层状、大小一致,胞浆蓝绿色,N/C为1∶2,杯状细胞密集分布。目镜10倍、物镜10倍条件下观察5个视野分别计杯状细胞数,取其均值,则平均1个低倍视野下见12.1个杯状细胞。见图1、2所示。0901.gif (22348 bytes)

    图1 CIC分级0级(×100)0902.gif (21681 bytes)
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    图2 CIC分级0级(×400)

    1级:结膜上皮细胞轻扩大,胞浆蓝绿色,N/C为1∶3,无角化,杯状细胞开始减少,密度下降,平均1个低倍视野下见7.4个杯状细胞。见图3、4所示。0903.gif (20717 bytes)

    图3 CIC分级1级(×100)0904.gif (20587 bytes)

    图4 CIC分级1级(×400)

    2级:所有结膜上皮细胞均扩大,变扁平,胞浆兰绿或粉红色,N/C为1∶4~1∶5,轻度角化,杯状细胞明显减少,平均1个低倍视野下见2.7个杯状细胞。见图5所示。0905.gif (18435 bytes)
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    图5 CIC分级2级(×100)

    3级:结膜上皮细胞胞浆内出现颗粒状物,核固缩崩解,上皮细胞胞浆成粉红色,N/C为1∶6~1∶8,出现不同程度的角化,杯状细胞完全丧失,视野下不见杯状细胞。见图6~8所示。0906.gif (18882 bytes)

    图6 CIC分级3级(×400)0907.gif (17100 bytes)

    图7 CIC分级3级(×400)0908.gif (17195 bytes)
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    图8 CIC分级3级(×100)2 结果

    三组间各项检查均值经SPSS统计软件包处理,单因素方差分析,除S-I-T在非SS干眼组与SS干眼组差异无显著性外,其它检查在任何两组间差异均具显著性意义。结果见表1所示。

    表1 三组各项检查结果 (1a.gif (96 bytes)±s)

    例数(眼)

    S-I-T(mm)

    BUT(s)

    FLS(分)

    RBS(分)
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    GN(个/mm2)

    正常对照组

    45(90)

    11.7±4.5

    8.8±3.7

    0.5±0.8

    0.5±0.7

    63.0±22.8

    非SS干眼组

    50(100)

    4.3±3.0

    4.8±2.8
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    2.0±2.4

    2.7±1.8

    28.2±23.6

    SS干眼组

    30(60)

    2.6±2.0

    3.4±2.1

    3.6±2.5

    4.0±2.4

    14.9±14.1

    正常对照组CIC分级主要集中于0级和1级,N/C主要为1∶2,少数为1∶3,上皮细胞大小均匀一致,上皮细胞间散在较多的杯状细胞;非SS干眼患者CIC分级多集中于1级和2级,N/C主要为1∶3、1∶4、偶见1∶5,杯状细胞明显减少,上皮细胞核变长、梭形,蛇样变偶见,杯状细胞明显减少;SS干眼患者CIC分级主要为3级,N/C主要为1∶6或1∶7,明显角化,核固缩、崩解,几无杯状细胞。三组人群CIC分级情况及统计结果见表2所示。表2 三组CIC分级情况比较 单位:%(眼)
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    0级

    1级

    2级

    3级

    正常对照

    80(72)

    20(18)

    0

    0

    非SS干眼

    18(18)

    38(38)

    42(42)
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    2(2)

    SS干眼

    3(2)

    27(16)

    35(21)

    35(21)

    注:三组CIC分级经χ2检验,P<0.01,差异具显著性。

    各项检查的相关分析研究发现:杯状细胞数与RBS计分呈负相关,相关系数r=-0.3342,P<0.01,见图9所示。0909.gif (2920 bytes)
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    图9 杯状细胞数(GN)与RBS计分的相关分析

    3 讨论

    文献报道示杯状细胞数随取材部位的不同而不同,睑结膜杯状细胞数高于球结膜的,球结膜不同部位取材所检测的杯状细胞数亦不同,通过观察杯状细胞数变化可了解眼表粘液层的情况[5]。多位学者研究表明:正常人杯状细胞数不随年龄而改变,35岁后杯状细胞数仍较稳定,杯状细胞数与BUT、S-I-T的值不相关[5,6]。有学者研究认为N/C与年龄呈负相关,杯状细胞数随RBS染色计分的增加而减少,杯状细胞数降低可引起眼表保护水平的降低[7]。Rives L等[8]研究认为CIC与RBS是诊断SS特异敏感的指标,可以把它们作为SS早期诊断的指标。Alberto等[9]将CIC标准化,认为0.22μm滤纸孔径,60g压力印取的细胞数最多,且能最好保持细胞的形态。
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    我们曾对45例正常人按不同年龄段分组进行CIC的研究显示:杯状细胞数不随年龄的增加而减少。本研究三组间CIC分级情况观察可见,正常对照组CIC分级多集中于0级(共占80%),非SS干眼组CIC分组多集中于1级、2级(共占80%)。SS干眼组CIC分组多集中于2级、3级(共占70%)。三组间CIC分级χ2检验,P<0.01,差异具有显著性。说明可通过CIC分级来区分正常人群与干眼症患者,并可了解干眼的程度。三组间杯状细胞数均值有显著性差异,任何两组之间杯状细胞数均值亦有显著性差异,KCS患者杯状细胞数低于正常组,且SS干眼患者杯状细胞较非SS干眼患者杯状细胞数更低,说明SS干眼患者不仅水层减少,粘液层的异常亦明显,这与临床患者的症状、体征相符。

    虎红着染变性上皮细胞及缺乏粘液层覆盖的眼表上皮细胞,对探查眼表粘液层完整性有其优越性,是检测眼表保护水平的敏感指标,是早期诊断KCS的敏感方法[10,11]。但最近多位学者相继报道虎红对角膜上皮细胞毒性大,可造成眼表面的损害,可加重原有眼表的不适,使其应用受到了一定限制[12]。本研究相关分析显示:杯状细胞数与RBS计分成负相关,杯状细胞数能很好反映粘液层的情况,它可取代虎红作为检测眼表保护水平的敏感指标,用于干眼的早期诊断。
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    另外,本研究通过CIC观察N/C情况表明:N/C与年龄呈负相关,N/C比值随着年龄的增加而降低,并随泪功能的降低而降低,与Paschides CA等[7]的研究结果相符,能在一定程度上帮助干眼的诊断,通过CIC还可观察炎细胞的情况:正常眼CIC中很少见炎细胞,而在KCS患者CIC中炎细胞常出现,说明干眼的发病中伴有炎症,推测可能是干眼患者泪液减少,各种免疫成分减少,防御力降低所致。胡燕华等[13]的研究也表明:干眼症患者结膜囊细菌培养阳性率明显高于正常对照组。这与本研究的推论相符。据此提示治疗干眼症应同时配合适当抗菌眼药。

    总之,CIC这种安全、实用、可重复的检查,可对KCS的早期诊断及疗效评估提供帮助。

    4 参考文献

    [1] Xu KP,Yaji Y,Tsubota Y.Decrease in corneal sensitivity and change in tear function in dry eye.Cornea,1996,15(3)∶235~239
, 百拇医药
    [2] Tsubota K,Toda I,Yagi Y,et al.Three different types of dry eye syndrome.Cornea,1994,13(3)∶202~209

    [3] Van Bijsterveld OP.Diagnostic tests in scicca syndrom.Arch Ophthalmol,1969,82∶10~14

    [4] Nelson JD.Diagnostic impression cytology in contact lens wear In:Dabezies OH,ed.Contact lenses:the CLAO guide to basic Science and Clinical practice.Boston:Little,Brown,1989.3cl~7

    [5] Kessing SV.Mucous gland system of conjunctiva.A quantitative normal anatomical study.Acta Ophthalmol (copenh),1968,95∶Suppl 37
, http://www.100md.com
    [6] Nelson JD & Wright JC.Conjunctival goblet cell densities in ocular surface disease.Arch Ophthalmol,1984,102∶1049~1051

    [7] Paschides CA,Petroutsos G,Psila K.Correlation of conjunctival impression cytology results with lacrimal function and age.Acta Ophthalmologica,1991,69∶422~425

    [8] Rives L,Rodriguez JJ,Alvarez ML,et al.Correlation between impression cytology and tear function parameters in Sjogen syndrome.Acta Ophthalmologica,1993,71∶353~359
, 百拇医药
    [9] Martinez AJ,Mills MB,Jaceldo KB,et al.Standardization of conjunctival impression cytology.Cornea,1995,14(5)∶512~522

    [10] Chodosh J,Dix RD,Howell CH,et al.Staining characteristics and antiviral activity of sulforhodmine B and lissamine green B.Invest Ophthalmol Vis Sci,1994,35∶1046~1058

    [11] Pflugfelder CS,Tseng SC,Yoshino K,et al.Correlation of goblet cell density and mucosal epithelial membrane mucin expression with Rose Bengal Staining in Patients with ocular irritation.Ophthalmology,1997,104∶223~235

    [12] Tabery HM.Toxic effect of rose bengal dye on the living human corneal epithelium.Acta Ophthalmol Scand,1998,76∶142~145

    [13] 胡燕华,贺乐荷,何玉兰等.108例干眼症之结膜囊细菌菌落.眼科研究,1995,13(3)∶204~206

    (收稿:1999-06-24), 百拇医药